Яка концентрація G418 для скринінгу клітин 293T? На що слід звернути увагу під час операції?

1. Принцип роботи скринінгу G418 клітин 293T
G418 є неоміциновим антибіотиком, який перешкоджає синтезу внутрішньоклітинних білків, викликаючи тим самим загибель клітин. Однак клітини з геном резистентності до неоміцину можуть виробляти білки стійкості, щоб протистояти токсичності G418. Тому в культуральному середовищі, що містить G418, можуть виживати і рости тільки клітини з геном стійкості до неоміцину.

2. Вплив концентрації G418 на клітини 293T
Вплив концентрації G418 на клітини 293T є багатогранним, включаючи ріст клітин, життєздатність клітин, морфологію клітин і резистентність клітин. Специфічні ефекти концентрації G418 на клітини 293T в основному проявляються в таких аспектах:
1. Ріст клітин: при нижчих концентраціях G418 (таких як 0.25 мг/мл) клітини 293T можуть нормально рости, щільність клітин поступово збільшується, а морфологія залишається хорошою. Зі збільшенням концентрації G418 (наприклад 0.5 мг/мл) швидкість росту клітин починає сповільнюватися, а щільність клітин повільно зростає. Коли концентрація G418 досягає 1 мг/мл, деякі клітини починають гинути, а щільність клітин значно знижується. Продовжуючи збільшувати концентрацію G418 (наприклад, 2 мг/мл), загибель клітин стає більш серйозною, а щільність клітин зменшується. 2. Життєздатність клітин: чим вища концентрація G418, тим нижча життєздатність клітин. За низьких концентрацій G418 (таких як 0.25 мг/мл) життєздатність клітин висока, морфологія клітин повна, а фарбування рівномірне. Зі збільшенням концентрації G418 життєздатність клітин поступово знижується, морфологія клітин стає нерегулярною, а фарбування нерівномірним. При високих концентраціях G418 (наприклад, 2 мг/мл) життєздатність клітин низька, морфологія клітин серйозно пошкоджена, а фарбування ненормальне.
3. Морфологія клітин: чим вища концентрація G418, тим більш нерегулярна морфологія клітин. При низьких концентраціях G418 морфологія клітини пухка, веретеноподібна або плоска. У міру збільшення концентрації G418 морфологія клітини стає нерегулярною, об’єм клітини зменшується, а краї клітин нечіткі. При високих концентраціях G418 морфологія клітини серйозно пошкоджується, тіло клітини надзвичайно маленьке, а краї клітини зламані.
4. Стійкість клітин: чим вища концентрація G418, тим сильніша стійкість клітин. При низьких концентраціях G418 клітини більш чутливі до G418 і схильні до клітинної загибелі. У міру збільшення концентрації G418 клітини поступово розвивають резистентність і рівень виживання клітин зростає. При високих концентраціях G418 стійкість клітин досягає свого піку, і клітини здатні протистояти токсичності високих концентрацій G418.
Тому для клітин 293T скринінгова концентрація G418 зазвичай становить 1-2 мг/мл. Цю концентрацію можна регулювати відповідно до експериментальних вимог. Взагалі кажучи, чим вища концентрація скринінгу, тим кращий ефект скринінгу, але це також призведе до певного пошкодження клітин. Тому при виборі скринінгової концентрації необхідно зважити мету експерименту та толерантність клітин. У фактичній роботі ви можете почати з нижчої концентрації, наприклад 0.5 мг/мл, спостерігати за ростом клітин і поступово збільшувати концентрацію, доки не знайдете відповідну концентрацію скринінгу.